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    公司新闻

    小鼠卵清蛋白特异性IgE(OVA-IgE)ELISA 检测试剂盒@赛培新闻

    点击次数:687   发布时间:2021/3/16 12:27:01

     中文说明书                      UNIONHONEST

    酶联免疫吸附测试 Enzyme Linked Immunosorbent Assay

      

    小鼠卵清蛋白特异性IgE(OVA-IgE)ELISA 检测试剂盒

    本试剂仅供研究使用  标本:血清或血浆

    试验原理

    小鼠卵清蛋白特异性IgE(OVA-IgE)试剂盒是夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA.已知小鼠卵清蛋白特异性IgE(OVA-IgE)浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将小鼠卵清蛋白特异性IgE(OVA-IgE)和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物AB,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中小鼠卵清蛋白特异性IgE(OVA-IgE)的浓度呈比例关系。

     

    试剂盒内容及其配制

    试剂盒成份(2-8℃保存)

    96孔配置

    48孔配置

    配制

    96/48人份酶标板

    1块板(96T

    半块板(48T

    即用型

    塑料膜板盖

    1

    半块

    即用型

    标准品:48μg/ml

    1瓶(0.6ml

    1瓶(0.3ml

    按说明书进行稀稀

    空白对照

    1瓶(1.0ml

    1瓶(0.5ml

    即用型

    标准品稀释缓冲液

    1瓶(6ml

    1瓶(3.0ml

    即用型

    生物素标记的抗OVA-IgE抗体

    1瓶(6ml

    1瓶(3.0ml

    即用型

    亲和链酶素-HRP

    1瓶(6ml

    1瓶(3.0ml

    即用型

    洗涤缓冲液

    1瓶(20ml

    1瓶(20ml

    按说明书进行稀释

    底物A

    1瓶(6.0ml

    1瓶(3.0ml

    即用型

    底物B

    1瓶(6.0ml

    1瓶(3.0ml

    即用型

    终止液

    1瓶(6.0ml

    1瓶(3.0ml

    即用型

    标本稀释液

    1瓶(6.0ml

    1瓶(3.0ml

    即用型

     

    自备材料

    1. 蒸馏水。

    2. 加样器:5ul10ul50ul100ul200ul500ul1000ul

    3. 振荡器及磁力搅拌器等。

     

    安全性

    1. 避免直接接触终止液和底物AB。旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。

    2. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

    3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

     

    操作注意事项

    1. 试剂应按标签说明书储存,使用恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。

    2. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。

    3. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质使用。

    4. 使用次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物AB液时,避免使用带金属部分的加样器。

    5. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

    6. 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

    7. 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。

    8. 加入试剂的顺序应致,以保证所有反应板孔温育的时间样。

    9. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

     

    样品收集、处理及保存方法

    1、 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

    2、 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

    3、 细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

    4、 组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液

    5、 保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

     

    试剂的准备

    1. 标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:

    24μg/ml

    5号标准品)

    150ul的原倍标准品加入150ul的标准品稀释液

    12μg/ml

    4号标准品)

    150ul5号标准品加入150ul的标准品稀释液

    6μg/ml

    3号标准品)

    150ul4号标准品加入150ul的标准品稀释液

    3μg/ml

    2号标准品)

    150ul3号标准品加入150ul的标准品稀释液

    1.5μg/ml

    1号标准品)

    150ul2号标准品加入150ul的标准品稀释液

    0μg/ml

    (空白对照)

    原始浓度不用稀释直接加入50ul

     

    2. 洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。

     

    操作步骤

    1. 使用,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。

    2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液11稀释后加入50ul于反应孔内。

    3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。

    4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加次。

    5. 每孔加入50ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。

    6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加次。

    7. 每孔加入底物AB50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。

    8. 取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。

    9. 450nm波长处测定各孔的OD值。

     

    建议使用的实验方案

     

    标准品浓度(μg/ml

     

    A

    24

    24

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    B

    12

    12

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    C

    6

    6

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    D

    3

    3

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    E

    1.5

    1.5

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    F

    0

    0

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    G

    样本

    样本

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    H

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

    样品

     

     

    局限

    5号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到精确的结果,根据实际吸光度值来选取曲线拟合。

     

    试剂盒性能

    1. 灵敏度:小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990

    2. 特异性:不与其它细胞因子反应。

    3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%

     

    1仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD

     

    2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的OVA-IgE标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的OVA-IgE含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

     

    3检测值范围:0.6μg/ml -26μg/ml

    4敏感度:0.1μg/ml

     

    武汉赛培生物,高品质elisa试剂盒供应商,现货供应,厂家直销,品质卓越,价格实惠,售后完善,提供免费代测服务,含税含运费,(ELISA检测试剂盒价格)欢迎您来电索取。

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